流式检测

一、项目介绍

　　流式细胞术是运用流式细胞仪对细胞或颗粒进行光谱鉴定、细胞分选、计数，广泛用于分析细胞表面和细胞内分子的表达水平、鉴定样品中细胞群的不同细胞类型、评估各细胞亚群的纯度以及分析细胞大小和内含颗粒。主要利用荧光标记的抗体检测蛋白水平，或结合了特定细胞分子的荧光染料，如PI与 DNA 的结合。

二、应用

　　常用于细胞表面分子如表面标记物的鉴定及水平分析，以鉴定、定性或定量特定类群的细胞，可以检测细胞内蛋白表达水平，可以利用特定染料分析细胞周期、细胞凋亡，利用线粒体电位染料分析线粒体膜电位，利用DHE等染料检测细胞内ROS水平。

三、检测项目

四、实验结果展示

1、细胞凋亡

2、细胞周期

3、流式JC-1检测

4、PI染色

5、ROS检测

6、表抗-单标

7、表抗-双标

五、样品保存运输

　　流式样本接收注意事项

　　①细胞凋亡

　　需要活细胞(外地样本不接)。如果细胞带荧光，一定要在交接单和培养板上备注，否则按照无荧光处理。如果因此导致检测结果不可用及样本浪费，我方概不负责，也不接受退单。

　　②细胞周期

　　周期需要细胞量比较多，6孔板送样要求汇合度在70%以上，但不能超过90%。外地样品，需用预冷的70%乙醇固定过夜后（贴壁细胞需要消化后进行固定），离心弃固定液，加1ml PBS重悬，封口膜封好，4 ℃运输寄到实验室。

　　③流式JC-1

　　需要活细胞(外地样本不接)。细胞汇合度高于70%(6孔板)，多提供2个空白孔，做阴性和阳性对照。如果细胞带红光或绿光，不能检测。

　　④流式ROS

　　需要活细胞(外地样本不接)。细胞汇合度高于70%(6 孔板)，多提供2 个空白孔，做阴性和阳性对照。如果细胞带绿光，不能检测。

　　⑤细胞表抗

　　提前确定公司是否有相应流式抗体(组化抗体不可用)，其他抗体需要客户自己提供(外地样本不接)。

　　⑥流式三标

　　提前告知样本具体数量和类型(血液或脾脏)。血样用抗凝管收集（胞内染色至少需要1.5 ml，表抗需要约1 ml），注意防止凝血，4 ℃保存运输。血样4 ℃保存最多只能存放一周，时间越久实验结果越差。取血后，需尽快寄到实验室;取脾脏时尽量将动物带到实验室，直接在实验室取材后开始实验，若不能将动物带到实验室，取材(整个脾脏)后将组织放在含有PBS 的EP 管或离心管中，4℃保存，提细胞必须在取材后6 小时以内完成，注意有些检测指标(Treg,TH1, TH2 等)需无菌提取。外地样本不接。